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PCR即聚合酶鏈反應(yīng)，是利用一段DNA為模板，PCR檢測(cè)方法在臨床上快速診斷細(xì)菌性傳染病等方面具有極為重要的意義。近日，重慶市一項(xiàng)使用PCR檢測(cè)方法的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)完成備案——《基于plo基因的山羊化膿隱秘桿菌PCR檢測(cè)方法》，并計(jì)劃于9月1日起實(shí)施。

DB50/T 1244-2022 基于plo基因的山羊化膿隱秘桿菌PCR檢測(cè)方法

《基于plo基因的山羊化膿隱秘桿菌PCR檢測(cè)方法》規(guī)定了基于plo基因的山羊化膿隱秘桿菌PCR檢測(cè)方法的縮略語、原理、試劑材料、儀器設(shè)備、方法步驟、結(jié)果判定、廢棄物處理等要求。此文件適用于山羊化膿隱秘桿菌病的PCR診斷。

文件針對(duì)山羊化膿隱秘桿菌的plo基因，設(shè)計(jì)合成特異引物，提取細(xì)菌DNA作為模板，在DNA聚合酶的作用下，經(jīng)高溫變性、低溫退火和中溫延伸的多次循環(huán)，使特異DNA片段的拷貝數(shù)放大數(shù)百萬倍。將擴(kuò)增的DNA片段經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，凝膠成像儀觀察，可見陽性條帶。該檢測(cè)方法，只能從化膿隱秘桿菌基因組DNA中擴(kuò)增出特異條帶。

文件中介紹到的試劑材料包括無水乙醇、核酸染料、DNA上樣緩沖液、瓊脂糖、TSA固體培養(yǎng)基、TSB液體培養(yǎng)基、TAE電泳緩沖液等。介紹的儀器設(shè)備包括電子天平、高壓滅菌鍋、高速離心機(jī)、二級(jí)生物安全柜、恒溫培養(yǎng)箱、PCR儀、電泳儀等。

另外，文件對(duì)工作中樣品的采集與保存、樣品的處理、DNA的提取、PCR擴(kuò)增等過程也進(jìn)行了詳細(xì)的闡述。要求檢測(cè)結(jié)果成立的條件為陽性對(duì)照PCR產(chǎn)物經(jīng)電泳后在264bp出現(xiàn)目的條帶，陰性對(duì)照PCR產(chǎn)物電泳后沒有條帶，并對(duì)結(jié)果描述及判定做了詳細(xì)說明。

文件詳情請(qǐng)見附件。

關(guān)鍵詞： 方法步驟 聚合酶鏈反應(yīng) 廢棄物處理